Анализ RW: морально устаревший, но самый доступный и до сих пор применяемый метод диагностики сифилиса

В начале 20 века немецкий иммунолог Август Вассерман обнаружил серологическую реакцию, которая до сих пор используется в диагностике сифилиса и носит его имя как RW. Анализ крови Вассермана входит в список обязательных анализов, которые проводятся беременным женщинам и перед любыми хирургическими вмешательствами.

Особенности реакции Вассермана

Мы объясняем, что это за тест, с точки зрения иммунологии. Тест проводится с использованием метода реакции связывания комплемента CRC. Комплемент — это группа специфических белков, которые участвуют в сложном каскаде иммунных ответов. Они являются частью врожденного и приобретенного иммунитета. Система комплемента неактивна до тех пор, пока не будет активирована чужеродным белком, продуцируемым инвазивными микроорганизмами.

Классический путь активации — после контакта с бактериями. На поверхности есть свои белки — антигены. Они чужды человеческому организму, и в ответ на них вырабатываются белки антител. Комплемент необходим для активации антител, и после образования комплекса с антигенами микроорганизм становится видимым для иммунных клеток макрофагов. Они поглощают бактерии и способствуют заживлению.

При заражении бледной спирохетой, возбудителем сифилиса, организм вырабатывает антитела, которые сохраняются в течение длительного времени. По их концентрации можно определить фазу заболевания, что показывает анализ крови RW.

Для теста Вассермана требуется 5 ингредиентов:

• диагностируемый антиген;
• диагностические антитела;
• индикаторный антиген — эритроциты ягненка;
• индикаторные антитела — гемолизины кролика;
• добавка.

Во время реакции требуются две системы антиген-антитело, одна индикаторная, а другая специфическая. Обычно взаимодействие между антигеном и антителом сопровождается фиксацией комплемента, в результате чего образуется комплекс, который визуально не виден. Поэтому необходима гемолитическая система с индикатором. Сыворотка сенсибилизирует эритроциты, делая их чувствительными к комплементу. Поэтому при его наличии происходит гемолиз — распад эритроцитов, раствор окрашивается.

Расшифровка результатов анализа крови RW основана на степени тяжести гемолиза. Если решение сохранило свое исходное чистое состояние, это означает, что все дополнения связаны с этой системой. Это индикатор появления комплексов антиген-антитело, указывающий на то, что антигены сифилиса присутствуют в сыворотке крови и что организм вырабатывает для них антитела. Это положительный результат.

В отсутствие специфических антител к антигену в крови их комплексы не образуются, а комплемент не активируется и остается свободным. Он связывается с индикаторными белками, вызывает гемолиз эритроцитов, и смесь в пробирке становится красной, что означает отрицательный результат теста RW.

Анализ крови на RW проводится в стерильных лабораторных условиях. Используемые биологические материалы и кровь пациента тщательно подготавливаются и титруются в различных пропорциях с комплементом, добавляя от 0,5 до 0,05 мл этого белка. Интенсивность реакции в каждой пробирке используется для оценки результатов реакции.

Кому рекомендуется исследование

Сифилис — опасное заболевание, передающееся половым путем. После заражения первые симптомы часто остаются незамеченными. На месте проникновения возбудителя появляются язвы. У женщин они могут появиться во влагалище, шейке матки, прямой кишке или во рту. Они не сопровождаются дискомфортом, болью или специфическими выделениями.

Если возбудитель находится на коже паховой области, половых губ или промежности, сифилис располагается в тех же местах. Язвы не чешутся, не отслаиваются и не проходят самостоятельно, не оставляя следов. Они не вызывают рубцов или обесцвечивания. По этой причине люди не обращаются за медицинской помощью.

Таким образом, существует законодательное требование о проведении экспресс-анализа крови на RW, который проводится в следующих ситуациях:

• всем беременным на момент постановки на учет, а также незадолго до родов;
• Перед любыми инвазивными процедурами, операциями, в том числе малоинвазивными;
• Во время обязательных медицинских осмотров при приеме на работу, а также ежегодных осмотров.

У беременных из-за специфики образования антител тесты могут быть выполнены дополнительно в середине беременности. Если женщина заражена трепонемой незадолго до беременности или на ранних сроках беременности, иммунная система не успевает среагировать, и тест будет отрицательным.

Гинеколог направит вас к RW, если во время осмотра обнаружит безболезненные генитальные язвы или увеличенные паховые лимфатические узлы. Дерматолог или терапевт направит пациентов на обследование, если они жалуются на увеличение лимфатических узлов и язв на половых органах, а также на появление бледной сыпи на теле. Самостоятельное обследование рекомендуется при случайном половом контакте, но не ранее, чем через 3-4 недели после предполагаемого заражения. Это связано с особенностями иммунного ответа и инкубационного периода трепонемы.

Особенности течения сифилиса и образования антител

Сифилис — это инфекция, передающаяся половым путем, заражение происходит при контакте с выделениями из половых путей больного и здорового человека. Для появления трепонемы достаточно контакта с кожей, поэтому первичные элементы часто появляются вокруг заднего прохода, на слизистой оболочке полости рта и в других местах, где она контактировала.

Инкубационный период может длиться от одной недели до 190 дней и зависит от индивидуальных особенностей иммунной системы. Он короче у женщин, инфицированных одновременно из двух источников, но может быть дольше, если другое инфекционное заболевание лечили антибиотиками во время фазы размножения.

С момента появления твердого рака начинается первичный сифилис. Длится в среднем 6-7 недель и делится на 2 периода:

• Серонегативный — анализ крови на RW микрометодом и другие типы реакций будут отрицательными;
• серопозитивный — проба Вассермана становится положительной и возникает через 3-4 недели после появления твердого рака.

Поэтому при обследовании пациентов с подозрением на первичный сифилис или тяжелый рак отрицательный результат RW является поводом для повторения теста через несколько недель. Ретроспективно можно определить возраст инфекции, отследить половой контакт или определить местонахождение полового партнера, который стал источником инфекции.

Разделение на серонегативный и серопозитивный периоды сегодня используется редко, потому что появились современные методы диагностики, при которых микроб, его ДНК или антитела могут быть обнаружены уже через несколько недель после заражения.

Вторичный сифилис развивается через 6-7 недель после первичного сифилиса. Возбудитель гематогенно распространяется по организму, поражает внутренние органы, на коже появляется сыпь. Этот период делится еще на три:

• ранняя, то есть свежая — первичная кожная сыпь, организм уже выработал антитела;
• рецидив — сыпь снова появилась из-за ослабленной иммунной системы;
• Скрытая — заболевание перерастает в скрытую форму, внешне не проявляющуюся.

Третичный сифилис развивается после многих лет болезни без лечения. В настоящее время в связи с широким применением антибиотиков и универсальной диагностики это очень редкое явление. Для него характерны изменения нервной системы, костей, хрящей, внутренних органов.

Образование антител происходит поэтапно. IgA появляется на ранних стадиях заболевания, после появления твердого рака выявляются IgM, а через некоторое время — IgG. Особенность заболевания заключается в том, что при третичном сифилисе иммунный ответ становится очень слабым и антитела могут не обнаруживаться в тесте RW.

Как подготовиться к исследованию и что влияет на точность анализа

Перед началом обследования необходимо направление от врача. Тест не проводится анонимно, так как сифилис относится к заболеваниям, требующим обязательного полового контакта и лечения половых партнеров. Это профилактическая мера по сдерживанию распространения болезни.

Специальной подготовки к тесту не требуется. Для выявления антител не имеет значения, берется кровь натощак или нет, но врачи советуют не есть утром и воздерживаться от алкоголя и жирной пищи вечером. Он стимулирует печень, высвобождая желчь в просвет кишечника и повышая уровень липидов в крови. Попытка получить сыворотку выявит хилоз, который не позволит провести анализ.

Во время беременности женщине нельзя есть, но можно пить воду. Если чувство голода плохо переносится, следует взять с собой в клинику конфеты или шоколад, чтобы поесть сразу после анализа крови.

Забор биологического материала

Классический тест RW требует взятия пробы венозной крови. Чаще всего его берут из локтевого изгиба, но допустимы и другие доступные сосуды. Вена, из которой берется кровь, затягивается жгутом над местом прокола. Пациента просят сжать и разжать кулаки, чтобы усилить кровоток из артерий. Лаборант обработает кожу антисептическим раствором и наберет в стерильный шприц 5-10 мл крови.

Из крови собирают сыворотку для дальнейших анализов, это нужно сделать как можно скорее, чтобы фибриноген не активировался и не образовался сгусток. Соответственно, элементы осаждаются в форме, и при добавлении ионов кальция фибриноген становится неактивным. Антитела не исчезают, поэтому биологический материал подходит для анализа.

Результаты реакции Вассермана

Продолжительность теста RW составляет примерно один день. Современные методы исследования, которые постепенно заменяют реакцию Вассермана с точки зрения времени ожидания, более или менее одинаковы. Однако другие методы исследования дают точный результат на ранней стадии появления антител или позволяют выявить ДНК возбудителя, поэтому кровь на RW собирают реже.

В случае предоперационных обследований следует учитывать валидность теста RW, чтобы в день поступления в больницу не было необходимости повторять обследование и не ждать результатов. Тест действителен в течение 2 месяцев, как и тесты на ВИЧ и гепатит. Однако в случаях, когда тест проводится во время предоперационной подготовки, врачи рекомендуют сделать его за месяц до предполагаемой даты операции или манипуляции, чтобы в случае положительного результата можно было провести лечение и повторное обследование.

Положительный результат

Как долго проводится анализ крови на RW, зависит от специфики лаборатории, но чаще всего результат готов уже на следующий день. Исследование предназначено для определения общего количества иммуноглобулинов классов M и G, только в этом случае получается положительный результат. Но разные значения можно найти в заключении, которое определяется количеством знаков «+» от 1 до 4. Чем больше плюсов, тем сильнее реакция Вассермана, тем больше антител у пациента.

В клинике ЗППП, куда обратиться в случае положительного результата, назначат дополнительные анализы для подтверждения или опровержения диагноза. Поэтому, когда вы получите положительный ответ на предварительном обследовании, не паникуйте, это не значит, что вы заболели.

Положительный результат теста RW появляется при следующих условиях:

• При свежем сифилисе или в первичном серопозитивном периоде;
• Вторичный серопозитивный сифилис, если вы заразились более 3 месяцев назад;
• Третичный сифилис в серопозитивном периоде;
• Если с момента лечения прошло менее года;
• В случаях серорезистентности после лечения заболевания.

Анализ крови на RW используется не только для диагностики сифилиса, но и для диагностики антифосфолипидного синдрома. Это заболевание, которое чаще встречается у женщин и характеризуется образованием антител к фосфолипидам. Они атакуют эмбрион, что приводит к обычным неудачам при беременности и ранним самопроизвольным абортам. Но можно сделать анализ крови на RW для диагностики антифосфолипидного синдрома, если подтверждено отсутствие сифилиса.

Отрицательный результат

Форма ответа лаборатории может быть отрицательной, что означает отсутствие антител. Однако, учитывая специфический патогенез заболевания и стадии образования антител, такой вывод не всегда является показателем здоровья.

Если вы сделаете тест в течение первых 3-4 недель после полового акта, при котором могла возникнуть инфекция, в вашем организме есть только иммуноглобулины класса А, которые не обнаруживаются тестом RW. В раннем серонегативном периоде, когда уже присутствуют первые симптомы заболевания, полный набор антител, необходимый для положительного результата, также отсутствует. Поэтому пациентам с подозрением на сифилис, но с отрицательным результатом теста, рекомендуется пройти дополнительные тесты или повторить тест через несколько недель.

Отрицательный результат может быть, когда у человека развилась третичная стадия патологии. В этом случае наблюдаются четкие, характерные симптомы высыпаний:

• нервная система;
• аорта и другие крупные сосуды;
• спинной мозг;
• кости и мышцы;
• слизистая оболочка;
• эпидермис.

У таких пациентов нарушены память, внимание и мышление. Диагностика третичного сифилиса по результатам исследований затруднительна.

Ложный результат

У взрослых положительный результат теста RW не всегда указывает на инфекцию. Существует понятие ложноположительного теста, которое связано с характером перекрестной реактивности антител. Ложное RW может произойти при следующих условиях:

• Беременная;
• у больных сахарным диабетом;
• при туберкулезе;
• У онкологических больных;
• Хронический алкоголизм;
• Инфекционный мононуклеоз;
• поражение печени в результате вирусного гепатита;
• пневмония;
• у пациентов с аутоиммунными заболеваниями;
• наркоманы;
• подагра;
• после заражения энтеровирусом;
• после недавней вакцинации.

Эти состояния или заболевания характеризуются напряжением иммунной системы, образованием большого количества антител, способных реагировать с комплементом в тесте RW. Поэтому пациентам с ложноположительным результатом требуется дополнительное тестирование. У беременных с положительным RW тесты проводятся по-другому. Иногда ложноположительный результат получается при заражении другими видами трепонем, не являющимися возбудителями сифилиса.

Альтернативные методики исследования

Реакция Вассермана считается устаревшим методом исследования и поэтому используется редко. Его заменили другие, более точные методы; их обычно называют тестом RW 2 или экспресс-методом. Некоторые клиники до сих пор ссылаются на тест на сифилис RW в своих формах, независимо от типа использованной реакции.

Все методы выявления заражения сифилисом делятся на прямые, при которых выявляется бледность трепонемы, и непрямые, основанные на поиске антител к возбудителю. На ранних стадиях, когда у человека есть тяжелая раковая язва или кожная сыпь, образец может быть взят из поражений. Тест можно провести тремя способами:

1. ПЦР — этот метод позволяет обнаруживать ДНК патогена, а при использовании ПЦР в реальном времени отображается количество микроорганизмов. Однако для постановки диагноза достаточно подтвердить наличие микроорганизма. Этот тест неэффективен при третичном сифилисе.
2. Микроскопия темного поля — направлена ​​на обнаружение живых трепонем в исследуемом материале. Лаборант может увидеть характерную форму спиральной бактериальной клетки, совершающей поступательное движение, 100% надежность метода, но результат не будет получен, если материал присутствует в крови, гное или в очаге интенсивного воспаления.
3. Тест RIT — это дорогостоящий биотест, который требует заражения лабораторных животных материалом от больного человека и ожидания результата в течение нескольких недель, поэтому тест не используется при раннем скрининге.

Согласно приказу Минздрава РФ при диагностике сифилиса следует использовать следующие методы:

1. Реакция осаждения микроосаждения — самый простой и быстрый метод тестирования, который предполагает образование иммунных комплексов с антителами в крови пациента, они выпадают в осадок в виде белых хлопьев.
2. PRGA — Прямая реакция гемагглютинации, чувствительность метода 100%, но при воспалительных заболеваниях возможны ложные результаты.
3. RIF, иммунофлуоресценция, выполняемая с использованием меченых антител, редко используется на практике из-за своей высокой стоимости.
4. РИБТ — иммобилизация бледных трепонем, дорогостоящий тест, применяемый в редких случаях.
5. ИФА — иммуноферментный анализ, дешевый и высокоспецифичный метод диагностики, иногда дает ложные результаты, в этом случае необходимо повторить анализ.

Иммуноблоттинг не является обязательным тестом. Метод диагностики применяется в сомнительных случаях, когда требуется углубленное обследование. Для получения результата требуется серия длительных реакций, поэтому на анализ уходит около 7 дней.

Анализ крови на RW позволяет диагностировать сифилис и начать лечение, для которого используется пенициллин. Этот метод тестирования постепенно уходит в прошлое и заменяется современными и экспресс-тестами.